核酸、蛋白質(zhì)在紫外光下有特定的吸收峰，核酸（包括DNA和RNA）的最大吸收值在260 nm左右，主要是由于嘌呤和嘧啶中的共軛雙鍵造成。蛋白質(zhì)的最大吸收峰在280 nm左右，絕大部分是由色氨酸和酪氨酸引起的。此外，230nm處的吸光值能反映乙醇、GTC、GuHCl、EDTA、多糖等的含量。用純RNA的標準品進行吸光值測定，分別測得OD₂₆₀和OD₂₈₀處的吸光值，比值為2.0。同理，DNA的比值為1.8。

在實際應用中，一般對于DNA來說，OD₂₆₀/OD₂₈₀在1.7-1.9之間即可滿足絕大部分PCR檢測實驗需求。

當OD₂₆₀/OD₂₈₀>1.9時，有較大的概率是由于RNA殘留導致OD260處吸光值升高，跑一個瓊脂糖凝膠電泳一看便知。這個數(shù)值提示后續(xù)再進行DNA提取實驗時，可以用RNase 進行消化，消除影響。

當OD₂₆₀/OD₂₈₀<1.7時，通常是由于蛋白殘留造成的，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測時，可觀察到點樣孔發(fā)亮。該狀況常見于溶液沉淀法DNA提取。

對于RNA來說，OD₂₆₀/OD₂₈₀在1.9-2.1之間，即可滿足熒光定量PCR檢測實驗需求。

當OD₂₆₀/OD₂₈₀<1.9時，樣本中存在蛋白質(zhì)殘留，常見于trizol法提取RNA時，主要是操作中吸入了中間層導致的。在進行此類實驗時，吸取80%上清液即可，寧可少吸也不要吸到中間層。

當OD_260/OD₂₈₀>2.1時，RNA產(chǎn)生降解導致OD₂₆₀處吸光值升高，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測，可以看到泳道內(nèi)彌散的條帶。提示我們在RNA提取時應采用新鮮樣品，在無RNase的實驗環(huán)境下快速操作避免樣本降解。您也可以嘗試TIANGEN RNA Easy Fast系列RNA提取試劑盒，20 min內(nèi)就能快速完成RNA提取。

值得注意的是，pH及鹽離子對OD₂₆₀/OD₂₈₀值有一定影響，酸性溶液或水溶液比弱堿性緩沖液的OD₂₆₀/OD₂₈₀值低0.3-0.4。因此，核酸濃度及質(zhì)量評估時，應注意核酸稀釋液和洗脫液保持一致。